抗卵巢抗体(antiovarianantibody，AoAb)检测

抗卵巢抗体(antiovarianantibody，AoAb)检测
    抗卵巢抗体(antiovarianantibody，AoAb)最早发现于卵巢早衰、过早闭经患者，已证实该病与自身免疫性病理反应关系密切，近年来发现AoAb的存在可以影响卵巢功能，且有显著的抗生育效应，因此更引人注目。AoAb检测的方法有iFT、RIA及ELISA法，但皆失之繁杂，或要求一定的设备条件，未能广泛应用。陈金娣等(1995)建立的检测AoAb免疫斑点法(1DA)，具有较好的敏感性、特异性及可重复性等优点；且简便易行，观察结果直观，便于基层应用。现介绍免疫斑点法检测AoAb。
 
  1、试剂  纯化人卵巢抗原(ovarian antigens，O-Ag)：将人卵巢组织洗净剪碎，浸于0.04mol／L，pH7，4Tris-HCl缓冲液中匀浆，过滤，将滤液5000r／min离心15min，沉淀悬浮于0.01％蔗糖溶液中，加入TritonX-100至1％浓度，搅拌2h，13 000r／min离心1h。上清液流穿抗人全血清-Sepharose4B柱。考马斯亮蓝法测定蛋白含量为1．2mg／mL，与抗人全血清，抗人纤维蛋白原抗体作双向免疫扩散，未见沉淀线，即为纯化O-Ag，用作包被抗原。
 
  2、操作步骤  将NC膜划成5annX 5mm的小方格，浸于0．01mol／L，pH7．4 PBS中30rain，滤纸吸干；取2gLO-Ag(4／lg／mL)点样于NC膜方格正中，室温自然干燥；用含1％BSA的pH7．4，0．01mol／LPBS封闭，37％60rain，洗涤NC膜3次，每次3min(以下同)，用滤纸吸干；加待测血清2rtl于包被O-Ag处，37~C 30min，洗涤后吸干；置HRP-SPA(最适工作浓度)溶液中，37~C 30min；洗涤后浸入底物(DAB-H2O2)溶液中，37~C避光反应5min；流水冲洗终止反应。加样处出现棕色斑点者为阳性，无色或与背景均呈淡黄色者为阴性。
 
  3、临床意义  阳性见于卵巢早衰，在不孕和流产患者中，AoAb阳性率(42．4％—52．2％)显著高于健康孕妇的阳性率(3．2％)，表明AoAb的存在与不孕和流产的发生之间有着密切关系。由于卵巢损伤、感染、炎症等原因造成卵巢抗原的外溢，在免疫功能存在某种紊乱的个体，诱导产生AoAb。AoAb会进一步加重卵巢的损伤，并导致子宫、胎盘的功能不健全，引起不孕和流产。